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动物源性食品中磺胺类药物残留量测定前的处理方法

点击次数:92  发布时间:2020-09-23
  磺胺类药物的危害及检测目的
 
  磺胺类药物是指在结构上具有对氨基苯磺酰胺的一类化合物的总称,主要适用于预防和治疗细菌感染性疾病的化学广谱抗菌药,种类繁多,应用广泛。磺胺类药物是应用较早的一类人工合成抗菌药,也是食品安全国家标准食品中兽药较大残留限量(GB31650-2019)中规定允许使用的一类药物。但是允许使用不代表滥用,任何药物的不当使用都可能导致动物可食部分药物富集,磺胺类药物的广泛使用同样带来了这个问题。磺胺类药物残留会对人体产生泌尿系统损害及肝损害、造血系统损害、过敏、细菌耐药性等危害,对人体健康造成威胁。
 
  本文阐述了如何将磺胺类药物从样品基质中分离提取出来,并经过净化后,转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为重点,依据国标GB/T21316-2007,为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。
 
  检测项目:磺胺类药物
 
  应用范围:食品/动物源性食品/肝、肾、肌肉、水产品和牛奶等
 
  方法原理:试样中加入C18填料后研磨均匀,用乙腈-水在微波辐照辅助下进行提取,乙腈饱和正己烷液液分配净化。液相色谱-质谱/质谱测定,外标法定量。
 
  前处理仪器:高速组织捣碎机;均质器;旋转蒸发器;氮吹仪;涡旋混匀器;分析天平:感量0.1mg和0.01g;真空泵;移液器1mL,,2mL;棕色鸡心瓶150mL;样品瓶2mL,带聚四氟乙烯旋盖;大号玻璃研钵;pH计,测量精度±0.2;离心机;棕色分液漏斗100mL;具螺旋盖聚四氟乙烯离心管50mL;超纯水仪;微波炉,家用,带有光波模式,功率700W;超声波发生器。
 
  检测仪器:LC-MS/MS+ESI源
 
  试样制备
 
  1、肌肉、内脏、鱼和虾
 
  从原始样品中取出代表性样品,经高速组织捣碎机均匀捣碎,用四分法缩分出适量试样,均分成两份,分别装入清洁容器内,加封后作出标记,一份作为试样,一份作为留样。将试样于-20℃保存。
 
  2、肠衣
 
  从原始样品中取出代表性样品,用剪刀剪成4mm2的碎片,用四分法缩分出适量试样,均分成两份,分别装入洁净容器内,加封后作出标记,一份作为试样,一份作为留样。将试样于-20℃保存。
 
  3、牛奶
 
  从原始样品中取出代表性样品,用组织捣碎机充分混匀,均分成两份,分别装入洁净容器内,加封后作出标记,一份作为试样,一份作为留样。将试样于4℃避光保存。
 
  前处理方法
 
  1、提取
 
  肌肉、内脏、鱼、虾和肠衣
 
  称取2g(精确至0.01g)试样置于玻璃研钵中,再称取约6g(精确至0.01g)C18填料(40μm)加至试样上用玻璃杵轻轻研磨,使样品与填料混合均匀(色泽均一,状态分散),装于50mL具螺旋盖聚四氟乙烯离心管中,加入25mL乙腈-水(100:3V/V)溶液,旋涡振荡1min,放入家用微波炉中在光波模式下微波辐照30s,3000r/min离心5min,将乙腈层移入100mL棕色分液漏斗中。离心后的沉淀物再加入25mL乙腈摇匀,微波辅助提取30s,3000r/min离心5min,合并乙腈提取液,待净化。
 
  牛奶
 
  取2g(精确至0.01g)牛奶,置于玻璃研钵中,加入6g(精确至0.01g)硅藻土,另加入6g(精确至0.01g)C18填料,用玻璃杵轻轻研磨30s,使样品与填料混合均匀(色泽均一,状态分散),装于50mL具螺旋盖聚四氟乙烯试管中,加入25mL乙腈-水(100:3V/V)溶液,旋涡振荡1min,放入家用微波炉中在光波模式下微波辐照30s,于3000r/min离心5min,将乙腈层移入100mL棕色分液漏斗中。离心后的沉淀物再加入25mL乙腈摇匀,微波辅助提取30s,于3000r/min离心5min,合并乙腈提取液,待净化。
 
  2、净化
 
  提取液中加入25mL乙腈饱和正己烷溶液,振摇5min,将底层乙腈溶液移入150mL棕色鸡心瓶中,加入10mL正丙醇,用旋转蒸发仪于45℃水浴中减压蒸发至近干,氮气流吹干。准确加入1mL乙腈-水(1:1V/V)溶液,超声30s溶解残渣,将溶解液移入10mL棕色离心管中,加0.5mL乙腈饱和正己烷,涡旋振荡2min,于3000r/min离心5min,弃去正己烷溶液,取底层乙腈-水溶液过0.22μm微孔滤膜,供高效液相色谱-质谱/质谱测定。
 
  注意事项
 
  1、因为磺胺类药物在光照下容易分解,其标准储备溶液需要避光存放,使用棕色试剂瓶保存。浓度为0.1mg/mL的标准储备液可在-20℃避光存放12个月。
 
  2、该国标方法采用二次提取沉淀物的方式提高回收率。
 
  3、提取液减压旋转蒸发时控制好温度和转速,防止爆沸,随时观察,至近干时及时停止取出鸡心瓶。
 
  4、由于该国标方法没有使用相对应的同位素内标来校正回收率,建议使用相应的空白样品基质提取液配制标准曲线。
 
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