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动物源性食品中喹诺酮类药物残留量测定前有哪些处理方法?

点击次数:89  发布时间:2020-09-23
  喹诺酮类药物的危害及检测目的
 
  喹诺酮类药物主要通过阻断DNA回旋酶,造成细菌DNA不可逆损害来达到抗菌效果,它们具有抗菌、抗支原体、抗球虫等作用。因喹诺酮类药物对多种革兰氏阴性菌具有良好的杀菌作用,且价格低廉,是养殖中常用到的三大类药物之一,主要用于预防和治疗畜禽及鱼类的感染性病状。食品安全国家标准食品中兽药较大残留限量(GB31650-2019)中规定允许使用的喹诺酮类药物包括:达氟沙星、二氟沙星、恩诺沙星、氟甲喹、恶喹酸、沙拉沙星。虽然允许使用,但是也要规范用药,严格把控药物使用剂量、休药时间、用药对象等方面内容。因为如果喹诺酮类药物残留通过食物进入人体,会造成人类中毒、过敏,甚至致癌、致畸、致突变等严重后果,给消费者的健康带来潜在危害。
 
  检测项目:喹诺酮类药物
 
  应用范围:食品/动物源性食品/猪肉、猪肝、猪肾、牛奶、鸡蛋等
 
  方法原理:用0.1mol/LEDTA-Mcllvaine缓冲液(pH4.0)提取样品中的喹诺酮类抗生素,经过滤和离心后,上清液经HLB固相萃取柱净化。高效液相色谱-质谱/质谱测定,用阴性样品基质加标外标法定量。
 
  前处理仪器:电子天平:感量0.0001g和0.01g;组织匀浆机;旋涡混合器;冷冻离心机(较高转速大于10000r/min);聚丙烯离心管(50mL);酸度计(0.01);氮吹仪;固相萃取仪
 
  检测仪器:LC-MS/MS+ESI源
 
  试样制备
 
  1、动物肌肉和动物内脏
 
  将现场采集的样品放入小型冷冻箱中运输到实验室,在-10℃以下保存,一周内进行处理。取适量新鲜或冷冻解冻的动物组织样品去筋、捣碎均匀。
 
  2、牛奶
 
  将现场采集的样品放入小型冷冻箱中运输到实验室,在-10℃以下保存,一周内进行处理。取适量新鲜或冷冻解冻的样品混合均匀。
 
  3、鸡蛋
 
  将现场采集的样品放入小型冷冻箱中运输到实验室,在-10℃以下保存,一周内进行处理。取适量新鲜的样品,去壳后混合均匀。
 
  前处理方法
 
  1.提取
 
  动物肌肉组织、肝脏、肾脏
 
  称取均质试样5.0g(精确到0.1g),置于50mL聚丙烯离心管中,加入20mL0.1mol/LEDTA-Mcllvaine缓冲溶液,1000r/min旋涡混合1min,超声提取10min,10000r/min离心5min(温度低于5℃),提取三次,合并上清液。
 
  牛奶和鸡蛋
 
  称取均质试样5.0g(精确到0.01g),置于50mL聚丙烯离心管中,加入40mL0.1mol/LEDTA-Mcllvaine缓冲溶液溶解,1000r/min旋涡混合1min,超声提取10min,10000r/min离心10min(温度低于5℃),取上清液。
 
  2、净化
 
  HLB固相萃取柱(200mg,6mL),使用时用6mL甲醇洗涤、6mL水活化。将提取液以2mL/min~3mL/min的速度过柱,弃去滤液,用2mL5%甲醇水溶液淋洗,弃去淋洗液,将小柱抽干,再用6mL甲醇洗脱并收集洗脱液。洗脱液用氮气吹干,用1mL0.2%甲酸水溶液溶解,1000r/min旋涡混合1min,用于上机检测。
 
  注意事项
 
  1、浓度为1mg/mL的喹诺酮标准物质储备液可在-20℃冰箱中避光保存3个月。
 
  2、该国标方法采用三次提取肉类样品沉淀物的方式提高回收率。
 
  3、在固相萃取净化过程中,淋洗后一定挤干小柱,防止洗脱时水进入洗脱液,导致浓缩过程中氮气吹不干洗脱液,影响定量的准确性。
 
  4、由于该国标方法没有使用同位素内标来校正回收率,建议使用相应的空白样品基质提取液配制标准曲线。还可以购置相对应的同位素内标,配合液质仪检测使用。
 
  5、配制EDTA-Mcllvaine缓冲溶液时,建议配合使用磁力搅拌器,省时省力,使乙二胺四乙酸二钠完全溶解。
 
  6、定容液涡旋混合复溶,有需要时可以超声30s,提高复溶效率。
 
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